求大佬指导，跑βactin下面多出一条不知道什么原因

今天做了wb实验，300mA恒流转膜，80V恒压电泳。之前制胶的时候胶制的好像还行，但是放冰箱过夜后就发现浓缩胶和分离胶的分界处有小气泡，想知道是否有影响。孵二抗时因为二抗不够，在配时可能膜有一条干了。而且跑的时候条带好像都偏下歪了，是什么原因呢？和蛋白定量有关系吗？求助各位大神。可以给点建议吗？

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近几年来，一些期刊对Western Blot(WB)实验的要求日益严格，特别是关于提交的WB图像必须是未裁剪、整膜的要求。以下是一些要求提交整膜WB图像的期刊，需要的小伙伴请收藏起来 需要做wb用作文章填充的可以找我，保证实验真实唯一可溯源 硕博论文标准交付标准 WB全膜带 marker(无编辑) WB提供全无编辑的全膜带 marker的原始图 WB条带分子量精确定制 WB数据分析统计学分析详尽 WB抗体货号全部真实可查 WB显影过程支持拍摄 WB流程专利技术 欢迎咨询 #wb# #实验

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已经两次这样了，现在上样40u，封闭3.5h，一二抗都是最新配的，我实在想不出是什么原因，应该也不是我提的蛋白有问题，上上次没这种情况发生，就这次和上次跑成了这样，救救孩子吧，我要崩溃了

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1 蛋白Marker定义和用途 蛋白Marker：即蛋白分子量标准，是一些已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。 在Western Blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是其中小小的一环，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白Marker还有显示转膜是否成功、以及蛋白在凝胶上的电泳程

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（1）抗体染色不充分 增加抗体浓度，延长孵育时间。 （2）酶失活 直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。 （3）标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低 设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。 （4）试剂不匹配 一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过设置内参照可以验

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1、转膜不充分 (1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)靶蛋白分子量小于10 000 选择小孔径的膜，缩短转移时间。 (3)靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。 (4)甲醇浓度过高 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替。 (5)转移时间不够 对于厚的胶

请问刚从六孔板里转到1.5mLEP的活细胞，没及时把它放到冰箱里，大约2个小时，目标蛋白200KDa左右，请问对WB结果的影响大吗？

皮下注射优缺点 实验外包 动物造膜 荧光检测 分子蛋白细胞等 皮下注射的操作与腹腔注射前半部分相同，针头平行扎入皮内，但是针头并不用呈现向腹腔刺入的步骤，然后注射样品，在皮下会鼓起一个小包。 皮下注射优点：通过微血管吸收，需迅速达到药效、不能或不宜经口服给药时采用。如胰岛素口服在胃肠道内易被消化酶破坏，失去作用，而皮下注射迅速被吸收。 皮下注射 缺点：不是药物都适用，有些会影响药物的作用时间，影响吸收。

大小鼠灌胃针（灌胃器） 型号：HL-GWZ 材质：不锈钢 主要用于对大小白鼠等试验动物进行药物灌送。当然也可以成为给普通宠物喂药或滴乳的好帮手。 小鼠灌胃针-幼鼠： 6、8号 4cm ； 9号(20G) 6cm； 一般小鼠用： 12号 5cm 大鼠灌胃针：16号 规格：10cm 特大鼠用： 20号 规格：11cm 小鼠灌胃针用途说明：6、8、9号(20G)比较细没有弯针。6#适合刚出生幼鼠用、8号20g以下幼鼠用、9号(20G)20g左右小鼠用，这三个型号是为了部分实验幼鼠特别开发的，其针头直径小于

慢性支气管肺炎模型 常选用大鼠、豚鼠或猴吸入刺激性气体(如二氧化硫、氯、氨水、烟雾等)复制人类慢性气管炎。现发现猪粘膜下腺体与人类相似,且经常发生气 管炎及肺炎,故认为是复制人类慢性气管炎较合适的动物，用去甲肾上腺素可以引起与人类相似的气管腺体肥大。

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相比于预制的梯度凝胶，在自制的固定浓度凝胶中，预染蛋白质分子量标准的条带会看起来显得略粗一些，而不如前者锐利。当条带较粗的时候，我们的实践经验显示，分子量的参考一般应以条带的上半部为准。 有些小伙伴的WB结果参照蛋白Marker，与预期大小不符，第一反应就是Marker不准。那么除了我们之前分析的预染蛋白Marker本身的准确性的问题，还有没有其他原因呢？ SDS-PAGE凝胶电泳按照分子量大小将蛋白分离，是蛋白在充分变性、还原条件下，

预染蛋白Marker，染料的标记反应和蛋白质的其它标记反应一样，其实际标记效率由于各种各样的因素而波动于一个合理的区间，不是一个确定的常数。在预染蛋白Marker的生产过程中，染料标记效率的波动将直接影响到最终标记产物的分子量大小。因此厂商都有一套优化的条件来实现相对稳定的染料标记效率。即使如此，标记效率的稳定性仍然不可能达到一个稳定的常数，仅能将其控制在一个比较小的波动范围。其结果是，染料标记的蛋白质产物的分子

预染蛋白Marker，又分单色预染Marker、双色预染Marker，多色预染Marker。如图： 单色预染蛋白Marker通常会加深某些条带的粗细，方便我们快速记忆和区分各个条带的大小。而彩色蛋白Marker则用不同的颜色，更加方便记忆区分。 除了上面介绍的，市面上还有一些其他类型的蛋白Marker：如显影蛋白Marker等。 显影蛋白Marker，蛋白条带中含有lgG结合位点，lgG结合位点会结合用于检测靶蛋白的一抗或二抗，使得蛋白Marker在印迹膜上可与目的条带一同呈现。

目前最常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker、预染蛋白Marker。 *非预染蛋白Marke 是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液。非预染Marker在电泳过程中看不到，电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用，无法在实验过程中起预示作用。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最准确。 *预染蛋白Marker 是纯化好的几种蛋白，通过与染料共价耦联后混合在一起，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到的一

关于蛋白质免疫印迹（Western Blot，即 WB），想必做蛋白实验的小伙伴们都不会陌生，作为免疫学中最常用的一种实验方法，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析条带大小和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。但是或许原理大家都懂，实验做起来却并不容易，每当我们准备好样本，满心以为自己可以做出这样的实验结果时却总是不如人意。那么为了避免出现以上问题，

现在实验需要检测45KD左右的蛋白分子，想用WB检测，是新手，想请问下血清该如何处理，要煮沸吗？要去除白蛋白吗？另外和组织样本相比，血清样本做WB还需要注意些什么啊？内参这块的话是不是要用到膜再生？请大家帮帮忙！

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SILAC ( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是利用哺乳动物细胞增殖对必需氨基酸的依赖性原理而设计的代谢标记蛋白质的方法。SILAC技术应用于定量蛋白质组研究,为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案,是目前最先进的、进行细胞中蛋白质相互作用和蛋白质表达差异的定量蛋白质组学技术。 技术特点 1、高效性:SILAC是体内标记技术,标记效率可高达100%; 2、定量精确,线性范围广,降低由于样品制备、实验

简介: 蛋白质印迹的 发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为Western Blot。蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 原理: 与Southern Blo

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