SILAC ( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是利用哺乳动物细胞增殖对必需氨基酸的依赖性原理而设计的代谢标记蛋白质的方法。SILAC技术应用于定量蛋白质组研究,为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案,是目前最先进的、进行细胞中蛋白质相互作用和蛋白质表达差异的定量蛋白质组学技术。
技术特点
1、高效性:SILAC是体内标记技术,标记效率可高达100%;
2、定量精确,线性范围广,降低由于样品制备、实验操作和仪器设备造成的实验误差,定量重复性好;
3、体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合,兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白,不受蛋白性质限制;
4、由于该技术属于体内标记,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响,不仅适合于进行全细胞蛋白的分析,还适合于膜蛋白的鉴定和定量;
5、与化学标记相比,SILAC方法蛋白需要量明显减少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量;
6、活体标记,更接近样品真实状态;
7、相容性:可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记。
适用范围
药物作用靶点研究
疾病标志物筛选
只适用于活体培养的细胞,对于生物医学研究中常用的组织样品,体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大,无法实现要求物种含有已完成全基因组测序或转录组测序注释的CDS信息
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