众所周知，iPS细胞是个很难养的细胞，MYC 诱导建立 iPS 细胞，培养时无需饲养层细胞通常情况下这个细胞复苏率很低，原因在于iPS细胞复苏过程中，通常需使用iPS细胞复苏培养基，复苏效率才可大大提高，而一般的细胞培养基完全不能达到这个效果。
iPS细胞在复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，
导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。
所以在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。
将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
使用移液管将冻存管中含有iPS细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
室温300g离心5min。
吸出培养基，确保细胞团完整。
然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
而在传代的过程中要注意：
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。
吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
加入适量的完全培养基终止消化。
移入离心管，300g离心5min，
离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
传代比例为 1：6—1：8，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
iPS细胞在复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，
导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。
所以在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。
将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
使用移液管将冻存管中含有iPS细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
室温300g离心5min。
吸出培养基，确保细胞团完整。
然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
而在传代的过程中要注意：
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。
吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
加入适量的完全培养基终止消化。
移入离心管，300g离心5min，
离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
传代比例为 1：6—1：8，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
