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今日科普:杂志要求的WB等实验的生物学重复是什么?

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什么是生物学重复?
有一些要求严格的期刊,是需要作者将同一个实验重复多次的。例如nature发表的文章的figure legend中,往往会标“this experiment was repeated twice”或“data representative of three independent experiment”。这些指的都是实验的重复次数,也就是要有生物学重复。当然有些杂志并没有对实验重复的次数有硬性要求,也自然不会要求作者上传所有重复实验的原始数据,仅需要上传出现在文章figure中用于作图的数据即可。
“生物学重复”是指在生物学实验中,对同一个处理或条件进行多次独立的实验。这样做的目的是为了确保实验结果的可靠性和可重复性。
通过进行生物学重复,我们可以评估实验结果的变异性,并确定观察到的效应是否具有统计学显著性。它还可以帮助我们识别潜在的实验误差或随机性,并减少单次实验中的偶然性因素对结果的影响。
例如,如果我们在研究一种新药物对肿瘤细胞生长的影响,我们可能会进行多个独立的实验,每个实验都使用相同的药物浓度和实验条件,但使用不同的细胞样本。这样的生物学重复可以帮助我们确定药物效果是否一致,并排除细胞样本之间的差异对结果的影响。
生物学重复在许多生物学研究领域都非常重要,包括分子生物学、细胞生物学、遗传学等。它有助于提高实验结果的可信度和可靠性,确保我们的研究结论具有更广泛的适用性和可重复性😉 。
另一个生物学重复相对的概念,就是技术重复。技术重复指为了解释实验操作所带来的差异而设置的重复,通常来自同一份样品。例如,做ELISA实验时一份样品测两个复孔,做qPCR实验时每测一个基因每个cDNA样品测3个复孔,在用细胞系做实验时,每个分组种3-6个孔。这些都是技术重复。
通常来说,生物学重复的价值高于技术重复。一次实验中宁可没有技术重复,也要有生物学重复。仅在生物学重复不可行的情况下,例如使用某个细胞系做实验,使用原代细胞做实验,或者样品来自于仅一个病人找不到第二个病人了,则可以用技术重复代替。
进行生物学重复时,如何控制实验误差?
对实验条件的严格控制也很重要,比如温度、湿度、光照等环境因素。保持这些条件的稳定性可以减少外部因素对实验结果的干扰。同时,对样本的处理和准备也要尽可能一致,例如细胞培养的时间、试剂的添加量等。
还有一点很关键,就是要进行适当的数据统计和分析。通过统计学方法,可以评估实验结果的显著性和可靠性,识别出可能存在的误差来源。并且,定期对实验设备进行校准和维护,确保其正常运行和准确性。
如果可能的话,采用质量控制样本或标准参照物也是个好办法。这些样本可以帮助我们监测和校正实验过程中的误差,并确保实验系统的稳定性。
WB的生物学重复需要注意些什么?
WB(Western blot)的生物学重复确实需要一些特别的注意事项😉 首先,确保样品的制备过程要一致,包括细胞裂解、蛋白提取和定量等步骤。使用相同的裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂和处理时间,以减少样品间的差异。
在电泳和转膜过程中,要控制好条件的一致性,比如电泳缓冲液的成分、电压和时间,以及转膜缓冲液和转膜时间。这些参数的稳定性对于获得可重复的结果非常重要。
抗体的选择和使用也很关键。选择经过验证和特异性高的抗体,并确保抗体的稀释度和孵育时间在每次实验中保持一致。此外,注意洗膜的条件,避免过度洗涤或洗涤不充分。
成像和数据分析时,使用相同的设备和软件设置,并采用合适的内参或标准蛋白进行校正。同时,记得记录每次实验的详细步骤和条件,以便在需要时进行追溯和比较。
如果可能的话,可以考虑进行技术重复,即对同一样品进行多次 WB 实验,以评估实验操作的可重复性。这样可以帮助识别和排除由于技术问题导致的误差


IP属地:河北1楼2024-03-19 16:29回复