作者：乳果糖
2023年8月16日，NMPA批准信达生物制药（苏州）有限公司申报的托莱西单抗注射液（商品名：信必乐）上市。托莱西单抗注射液为PCSK9抑制剂，可阻断血浆PCSK9与低密度脂蛋白受体（LDLR）的结合，进而阻止LDLR的内吞和降解，增加细胞表面LDLR表达水平和数量，增加LDLR对低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的重摄取，降低循环LDL-C水平，最终达到降低血脂的目的。该品种的上市为临床降脂治疗提供了新的治疗选择。
托莱西单抗在NMPA上市申请总审评时长为308个工作日，而2023年NMPA所用获批新药的审评时长中位数为541工作日，由此说明托莱西单抗的NDA申报过程较为顺利。以下为托莱西单抗在NMPA的审评历程。
表1 托莱西单抗在NMPA的审评历程
托莱西单抗注射液是首个国产的PCSK9抑制剂，也是全球第三个PCSK9单克隆抗体。在此之前，经FDA获批的两款PCSK9单抗分别为赛诺菲的Praluent与安进的REPATHA。
目前，药审中心尚未公开托莱西单抗注射液的技术审评报告。由此，笔者整理了全球首款获批的PCSK9单抗Praluent在美国BLA申请中的非临床研究资料，以供参考学习。
表2. 全球首款PCSK9单抗Praluent
表3. Praluent非临床研究在FDA的监管历史
药效学
主要药效学：肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）的表达及其从血液循环中清除LDL-C的功能取决于细胞内胆固醇水平和血清 PCSK9 浓度。血清 PCSK9 通过促进肝脏 LDLR 蛋白的内化和溶酶体降解，降低肝脏 LDLR 蛋白水平（见图 1）。任何影响 PCSK9 表达的调节剂都会影响肝脏 LDLR 密度以及LDLR从血液循环中清除 LDL-C 的能力。
图1. PCSK9单抗的作用机制[1]
申请人进行了文献数据调研，以支持 PCSK9 在调节 LDL-C 方面发挥重要作用。
体外研究：评估细胞Praluent抑制PCSK9 后，HepG2细胞对LDL-C吸收的影响。结果表明，可Praluent可阻断表达人、猴、大鼠、小鼠和仓鼠PCSK9 的 HepG2 细胞中的 LDLR，对 LDL-C 摄取的调节具有强效阻断作用。与野生型 PCSK9 相比，PCSK9 的功能增益突变会增加 LDLR 的清除率。
体内研究：在概念验证仓鼠模型中，Praluent导致总胆固醇和LDL-C明显下降， HDL-C也略有下降。
次要药效学：理论上，Praluent抑制 PCSK9 会导致结肠中胆汁酸水平升高、诱发免疫抑制和丙型肝炎感染率升高。对胆汁酸与免疫抑制的担忧被纳入Praluent与Lipitor联合使用的猴长毒试验中作为终点评估。同时，申请人通过一项专门的研究解决了丙型肝炎感染性增加的问题。
安全药理学：Praluent是一种含有人类 IgG1 的 Fc 结构域的全人源抗体。在表达人LDLR的 HEK293、SW13、HepG2和HUVEC的细胞中，测定了Praluent的 ADCC与CDC毒性。结果显示Praluent的 ADCC与CDC毒性为阴性。
中枢神经系统评估：在对大鼠和猴子进行的主要长毒研究中，未观察到与阿利珠单抗有关的对外周神经元的明显影响。
药代动力学研究
体内PK：大鼠和食蟹猴（吸收、代谢）
大鼠或食蟹猴体内分别进行Praluent的单剂量静脉或皮下注射给药。静脉注射，在剂量范围内，Cmax 的增加大致与剂量成比例，AUC 的增加略高于剂量成比例。
而皮下注射，Cmax 的增加与剂量不成比例。
在大鼠体内，半衰期与剂量和给药突降无关，T1/2为100-120 h。给药剂量为5-15 mg/kg时，体内的生物利用度为50%，当为低剂量1 mg/kg时生物利用度为100%。Praluent的两种给药途径清除率相似，不同剂量间也没有明显差异。
在食蟹猴体内，给药1 mg/kg(sc.或v.i.)或3 mg/kg（v.i.）时，T1/2为50-60 h。
当两种给药途径给药剂量为15 mg/kg，会出现多相消除，其中90%的消除发生在T1/2=150 h时。同时，进入血管外空间的分布容积有限。清除率随着剂量的增加而降低，这与高剂量时清除过程达到饱和是一致的。Praluent进入血管外空间的分布容积有限。其清除率随着剂量的增加而降低，这与高剂量时清除过程达到饱和是一致的。
毒理学研究
一般毒理学：
Praluent进行的重复给药毒性研究如下表所示：
表4. Praluent非临床重复给药试验
在大鼠和食蟹猴上分别开展了4项遵循GLP的重复给药毒性研究（伴随毒代及免疫原性），以及3项在食蟹猴体内进行的Praluent与他汀类药物Lipitor联合给药的重复给药毒性试验。
在给药期为26周的毒性研究中，大鼠和食蟹猴对Praluent的耐受性良好。每周皮下注射一次（根据血浆暴露量计算），与 150 mg Praluent Q2W的最大推荐人用剂量（MRHD）相比，大鼠和猴的暴露倍数分别高达 11 倍和 103 倍。大鼠和食蟹猴的LDL-C降幅分别高达 75% 和 80%，但未观察到明显的不良反应。
此外，一项食蟹猴体内进行的为期13周的Praluent（MRHD 为 100 倍，Q1W，s.c.）与Lipitor（MRHD 为 8 倍，QD，p.o.）联合给药毒性研究，显示这该给药组合对降LDL-C有叠加效应（高达 99%），对降低HDL-C（高达 71%）也有不错的效果，与此同时未发现他汀类药物引起的叠加或协同毒性效应。
在主要的长期毒性研究中，将Praluent的免疫原性纳入试验终点进行考察。Praluent在大多数试验动物体内都能维持最大药理作用。总体而言，大鼠产生中和ADA的比率较低，猴子的比率可忽略不计，在任何研究中都不会影响Praluent的毒理学评估。
遗传毒性：根据ICH-S6，对Praluent未进行基因毒性评估，因为这种单克隆抗体不会与DNA发生合理的相互作用。
致癌性：根据ICH S6(R1)，申请人提供以下论据以支持豁免Praluent致癌性非临床评估的申请：
表5. 支持Praluent豁免致癌性非临床研究的论据
生殖毒性：根据ICH S6(R1)，在性成熟的食蟹猴中进行了为期26周的慢性毒理学研究伴随评估生育能力终点，未发现Praluent对生育终点的影响。
对大鼠进行了胚胎-胎仔发育毒性研究，最高给药剂量为12倍MRHD，观察到母鼠死亡（4/25 只动物）；但在2.6倍安全系数的较低剂量下则未观察到毒性。
对孕猴进行了一项强化围产期发育毒性研究，最高剂量为81 倍MRHD，未观察到死亡与明显毒性。在经给药孕猴的子代出生后120到180天期间，观察到幼猴对已知抗原的TDAR出现与剂量相关的下降。这表明幼猴在子宫内暴露于Praluent使其适应性免疫受到抑制，且在高剂量是免疫抑制具有统计学意义（p<0.01）。但未能确定不具有免疫抑制作用的剂量水平。
局部耐受性：尚未进行专门的局部耐受性研究。但在对猴子进行的关键毒理学研究中，进行了注射部位的观察分析。
其他毒性研究：人、食蟹猴以及大鼠的组织交叉反应研究，结果表明食蟹猴、SD大鼠与人体组织类似的组织交叉反应，认为大鼠与食蟹猴是相关种属。该结果与主要药效学研究结果（大鼠与食蟹猴都能表达 PCSK9，且与Praluent有高结合亲和力）共同支持大鼠和猴子为Praluent毒理学试验的药理相关物种。
总结
总体上， FDA认为Praluent的非临床研究策略与现有监管指南一致，未发现重大问题。所有关键研究均按照GLP进行。对于非临床生殖毒性研究中所提示的未清楚临床相关性的安全风险，监管部门已与申请人对该研究结果进行充分沟通，对申请人做出以下要求。
表6. FDA对Praluent非临床生殖毒性研究结果的意见
通过对全球首款PCSK9单抗Praluent非临床申报资料分析，了解FDA对靶向PCSK9抗体药物支持临床开发以及上市申请的非临床研究的关注点，对后续更多靶向PCSK9的抗体药物开发具有参考意义。
参考文献：
[1] Lambert G, Sjouke B, Choque B, Kastelein JJ, Hovingh GK. The PCSK9 decade. J Lipid Res. 2012 Dec;53(12):2515-24.
END
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2023年8月16日，NMPA批准信达生物制药（苏州）有限公司申报的托莱西单抗注射液（商品名：信必乐）上市。托莱西单抗注射液为PCSK9抑制剂，可阻断血浆PCSK9与低密度脂蛋白受体（LDLR）的结合，进而阻止LDLR的内吞和降解，增加细胞表面LDLR表达水平和数量，增加LDLR对低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的重摄取，降低循环LDL-C水平，最终达到降低血脂的目的。该品种的上市为临床降脂治疗提供了新的治疗选择。
托莱西单抗在NMPA上市申请总审评时长为308个工作日，而2023年NMPA所用获批新药的审评时长中位数为541工作日，由此说明托莱西单抗的NDA申报过程较为顺利。以下为托莱西单抗在NMPA的审评历程。
表1 托莱西单抗在NMPA的审评历程
托莱西单抗注射液是首个国产的PCSK9抑制剂，也是全球第三个PCSK9单克隆抗体。在此之前，经FDA获批的两款PCSK9单抗分别为赛诺菲的Praluent与安进的REPATHA。
目前，药审中心尚未公开托莱西单抗注射液的技术审评报告。由此，笔者整理了全球首款获批的PCSK9单抗Praluent在美国BLA申请中的非临床研究资料，以供参考学习。
表2. 全球首款PCSK9单抗Praluent
表3. Praluent非临床研究在FDA的监管历史
药效学
主要药效学：肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）的表达及其从血液循环中清除LDL-C的功能取决于细胞内胆固醇水平和血清 PCSK9 浓度。血清 PCSK9 通过促进肝脏 LDLR 蛋白的内化和溶酶体降解，降低肝脏 LDLR 蛋白水平（见图 1）。任何影响 PCSK9 表达的调节剂都会影响肝脏 LDLR 密度以及LDLR从血液循环中清除 LDL-C 的能力。
图1. PCSK9单抗的作用机制[1]
申请人进行了文献数据调研，以支持 PCSK9 在调节 LDL-C 方面发挥重要作用。
体外研究：评估细胞Praluent抑制PCSK9 后，HepG2细胞对LDL-C吸收的影响。结果表明，可Praluent可阻断表达人、猴、大鼠、小鼠和仓鼠PCSK9 的 HepG2 细胞中的 LDLR，对 LDL-C 摄取的调节具有强效阻断作用。与野生型 PCSK9 相比，PCSK9 的功能增益突变会增加 LDLR 的清除率。
体内研究：在概念验证仓鼠模型中，Praluent导致总胆固醇和LDL-C明显下降， HDL-C也略有下降。
次要药效学：理论上，Praluent抑制 PCSK9 会导致结肠中胆汁酸水平升高、诱发免疫抑制和丙型肝炎感染率升高。对胆汁酸与免疫抑制的担忧被纳入Praluent与Lipitor联合使用的猴长毒试验中作为终点评估。同时，申请人通过一项专门的研究解决了丙型肝炎感染性增加的问题。
安全药理学：Praluent是一种含有人类 IgG1 的 Fc 结构域的全人源抗体。在表达人LDLR的 HEK293、SW13、HepG2和HUVEC的细胞中，测定了Praluent的 ADCC与CDC毒性。结果显示Praluent的 ADCC与CDC毒性为阴性。
中枢神经系统评估：在对大鼠和猴子进行的主要长毒研究中，未观察到与阿利珠单抗有关的对外周神经元的明显影响。
药代动力学研究
体内PK：大鼠和食蟹猴（吸收、代谢）
大鼠或食蟹猴体内分别进行Praluent的单剂量静脉或皮下注射给药。静脉注射，在剂量范围内，Cmax 的增加大致与剂量成比例，AUC 的增加略高于剂量成比例。
而皮下注射，Cmax 的增加与剂量不成比例。
在大鼠体内，半衰期与剂量和给药突降无关，T1/2为100-120 h。给药剂量为5-15 mg/kg时，体内的生物利用度为50%，当为低剂量1 mg/kg时生物利用度为100%。Praluent的两种给药途径清除率相似，不同剂量间也没有明显差异。
在食蟹猴体内，给药1 mg/kg(sc.或v.i.)或3 mg/kg（v.i.）时，T1/2为50-60 h。
当两种给药途径给药剂量为15 mg/kg，会出现多相消除，其中90%的消除发生在T1/2=150 h时。同时，进入血管外空间的分布容积有限。清除率随着剂量的增加而降低，这与高剂量时清除过程达到饱和是一致的。Praluent进入血管外空间的分布容积有限。其清除率随着剂量的增加而降低，这与高剂量时清除过程达到饱和是一致的。
毒理学研究
一般毒理学：
Praluent进行的重复给药毒性研究如下表所示：
表4. Praluent非临床重复给药试验
在大鼠和食蟹猴上分别开展了4项遵循GLP的重复给药毒性研究（伴随毒代及免疫原性），以及3项在食蟹猴体内进行的Praluent与他汀类药物Lipitor联合给药的重复给药毒性试验。
在给药期为26周的毒性研究中，大鼠和食蟹猴对Praluent的耐受性良好。每周皮下注射一次（根据血浆暴露量计算），与 150 mg Praluent Q2W的最大推荐人用剂量（MRHD）相比，大鼠和猴的暴露倍数分别高达 11 倍和 103 倍。大鼠和食蟹猴的LDL-C降幅分别高达 75% 和 80%，但未观察到明显的不良反应。
此外，一项食蟹猴体内进行的为期13周的Praluent（MRHD 为 100 倍，Q1W，s.c.）与Lipitor（MRHD 为 8 倍，QD，p.o.）联合给药毒性研究，显示这该给药组合对降LDL-C有叠加效应（高达 99%），对降低HDL-C（高达 71%）也有不错的效果，与此同时未发现他汀类药物引起的叠加或协同毒性效应。
在主要的长期毒性研究中，将Praluent的免疫原性纳入试验终点进行考察。Praluent在大多数试验动物体内都能维持最大药理作用。总体而言，大鼠产生中和ADA的比率较低，猴子的比率可忽略不计，在任何研究中都不会影响Praluent的毒理学评估。
遗传毒性：根据ICH-S6，对Praluent未进行基因毒性评估，因为这种单克隆抗体不会与DNA发生合理的相互作用。
致癌性：根据ICH S6(R1)，申请人提供以下论据以支持豁免Praluent致癌性非临床评估的申请：
表5. 支持Praluent豁免致癌性非临床研究的论据
生殖毒性：根据ICH S6(R1)，在性成熟的食蟹猴中进行了为期26周的慢性毒理学研究伴随评估生育能力终点，未发现Praluent对生育终点的影响。
对大鼠进行了胚胎-胎仔发育毒性研究，最高给药剂量为12倍MRHD，观察到母鼠死亡（4/25 只动物）；但在2.6倍安全系数的较低剂量下则未观察到毒性。
对孕猴进行了一项强化围产期发育毒性研究，最高剂量为81 倍MRHD，未观察到死亡与明显毒性。在经给药孕猴的子代出生后120到180天期间，观察到幼猴对已知抗原的TDAR出现与剂量相关的下降。这表明幼猴在子宫内暴露于Praluent使其适应性免疫受到抑制，且在高剂量是免疫抑制具有统计学意义（p<0.01）。但未能确定不具有免疫抑制作用的剂量水平。
局部耐受性：尚未进行专门的局部耐受性研究。但在对猴子进行的关键毒理学研究中，进行了注射部位的观察分析。
其他毒性研究：人、食蟹猴以及大鼠的组织交叉反应研究，结果表明食蟹猴、SD大鼠与人体组织类似的组织交叉反应，认为大鼠与食蟹猴是相关种属。该结果与主要药效学研究结果（大鼠与食蟹猴都能表达 PCSK9，且与Praluent有高结合亲和力）共同支持大鼠和猴子为Praluent毒理学试验的药理相关物种。
总结
总体上， FDA认为Praluent的非临床研究策略与现有监管指南一致，未发现重大问题。所有关键研究均按照GLP进行。对于非临床生殖毒性研究中所提示的未清楚临床相关性的安全风险，监管部门已与申请人对该研究结果进行充分沟通，对申请人做出以下要求。
表6. FDA对Praluent非临床生殖毒性研究结果的意见
通过对全球首款PCSK9单抗Praluent非临床申报资料分析，了解FDA对靶向PCSK9抗体药物支持临床开发以及上市申请的非临床研究的关注点，对后续更多靶向PCSK9的抗体药物开发具有参考意义。
参考文献：
[1] Lambert G, Sjouke B, Choque B, Kastelein JJ, Hovingh GK. The PCSK9 decade. J Lipid Res. 2012 Dec;53(12):2515-24.
END
上海科志康医药科技有限公司，成立于2016年，是一家以药品监管科学为特色的研发咨询公司，致力于为客户定制法规解决方案，减少和避免在注册申报时“少做、漏做、重做、多做”的风险。
在药品注册时，公司提供高品质的一站式注册申报和模拟现场检查服务，为客户提高药品注册成功率。在研发过程中，公司提供第三方项目管理服务，法规前置，过程管理，协助制药企业提升药品研发效率。
目前，公司已与国内外79个知名制药企业建立合作，取得了100多项IND/NDA/ANDA佳绩。
公司使命：为制药企业提供专家解决方案，提升药品全生命周期合规性
公司愿景：助力制药企业研发和生产，让老百姓吃上放心药
