外泌体做WB的内参基因一直存在争议。现阶段，外泌体RNA检测使用的内参基本都是照搬经典细胞生物学研究中大量使用的PCR内参，如长链RNA的内参GAPDH，ACTIN，18S以及miRNA的内参U6等。该类内参基因在细胞中组成型表达，对于维持细胞的基本功能不可或缺。同时90%以上的研究工作都是采用单一内参来进行不同待测基因的归一化校正。虽然有一些文章进行了探究，但还是存在一定的局限性。 首先GAPDH及Actin基因的表达，不仅在不同肿瘤类型中存在显著差异，而且在正常组织与肿瘤组织中也存在显著的差异。而且目的基因的表达不同，但都使用单一内参进行归一化矫正，会使得不同表达丰度的定量结果都具有不同的准确程度。
除此之外由于外泌体RNA是体液RNA的一个亚类，和传统液体活检提取总RNA进行后续检测还是有一定的区别，外泌体RNA在检测前，需要经过一系列的外泌体提取过程。如果我们选定的内参基因在体液中不是外泌体特异性的，而是同时以游离形式、囊泡包裹形式存在，那么，内参基因的表达就会受到该外泌体提取过程的严重影响，进而丧失了内参的基本价值。总的来说，目前不存在适用于所有样本类型外泌体RNA的统一内参。要根据所研究样本的类型，选择适合的稳定表达内参基因。
除此之外由于外泌体RNA是体液RNA的一个亚类，和传统液体活检提取总RNA进行后续检测还是有一定的区别，外泌体RNA在检测前，需要经过一系列的外泌体提取过程。如果我们选定的内参基因在体液中不是外泌体特异性的，而是同时以游离形式、囊泡包裹形式存在，那么，内参基因的表达就会受到该外泌体提取过程的严重影响，进而丧失了内参的基本价值。总的来说，目前不存在适用于所有样本类型外泌体RNA的统一内参。要根据所研究样本的类型，选择适合的稳定表达内参基因。
