22. 选择一定的条件使溶液中存在的某些杂蛋白变性沉淀而不影响所需蛋白质的方法称为选择性变性沉淀法.
23. rRNA约占细胞内RNA的80%，一般提取的RNA主要是rRNA.
24. 用显微镜观察结晶的有无及形状,也可以作为判断提纯物质纯化程度的一种方法.
25. 通常使DNP/RNP复合物有效解聚的方法,主要是采用加入去污剂,有机溶剂或蛋白水解酶.
26. 在破细胞的溶液中,加入适量的阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)或其他去污剂有利于使膜蛋白和脂肪溶解,将DNP/RNP复合物解聚.
27. 核酸的沉淀分离: 有机溶剂沉淀法,等电点沉淀法,钙盐沉淀法,选择性溶剂沉淀法.
28. 提取动物核酸时,饥饿12h,植物的置暗室培养数天,可消除杂糖的干扰.
29. 混杂于核酸提取液的多糖类物质一般可用选择性沉淀剂.
30. DNA1~2mol/LNaCl溶液中溶解度较大,而RNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度较大.
31. 影响透析速度的因素： 半透膜的通透性, 透析外液的更换, 温度, 压力
32. 离心分离:差速离心法,密度梯度离心,等密度离心,
第三章:层析
1.层析技术是利用混合物中各组分的物理化学性质的不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的技术. 
2.固定相: 固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质,也可以是液体物质,这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用.
3. 分配层析是利用各组分的分配系数不同而予以分离的方法.
33. 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动向构成柱状的一种层析方法.
34. 常用的吸附剂有极性和非极性两种,前者有羟基磷灰石,硅胶,氧化铝和人造沸石,后者有活性炭.
35. 固定相是由层析基质组成,包括固体物质和液体物质.
36. 在层析过程中,推动固定相上的物质沿一定方向移动的液体或气体称为流动相.
37. 凡能够将其它物质聚集到自己表面上的物质，都称为吸附剂
38. 平衡液:在溶解样品和平衡固定相时所使用的缓冲液的简称.
39. 洗涤液:在洗涤固定相中部分杂质时所使用的缓冲液的简称.
40. 洗脱液:能够驱使固定相中有效成分和部分杂质延一定方向有规律地移动,并能使有效成分与其它组成物相互分开的缓冲液.
41. 分配系数是 是指一种溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解达到平衡时，该溶质在两相溶剂中的浓度比值,常用K表示.
42. 纸层析属于典型的分配层析.
43. 溶质在滤纸上移动的速率可用Rf值表示, Rf= a/b.a：溶质在固定相移动的距离;b：流动相移动的距离;Rf值决定于被分离物质在两相间的分配系数以及两相间的体积比.
44. 影响Rf值的主要因素:物质的结构和极性, 滤纸, 层析所用的溶剂,pH值,温度,展开方式,样品溶液中杂质.
45. 凝胶层析是以各种凝胶为固定相，利用混合液中所含各物质的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术.
46. 凝胶层析原理: 当含有各种组分的样品流经凝胶层析柱时，大分子物质由于分子直径大，不易进入凝胶颗粒的微孔，沿凝胶颗粒的间隙以较快的速度流过凝胶柱。而小分子物质能够进入凝胶颗粒的微孔中，向下移动的速度较慢，从而使样品中各组分按相对分子质量从大到小的顺序先后流出层析柱，而达到分离的目的.
47. 排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量
48. 吸附层析的基本原理:在吸附层析法中,实用的固定相基质是颗粒状的吸附剂.在吸附剂表面存在着许多随即分部的吸附位点,这些位点通过范德华力和静电力与蛋白质和核酸等生物分子结合.


49. 吸附剂的选择:都应具备表面积大,颗粒均匀,吸附选择性好,稳定性强和成本低廉等性能.
50. 洗脱液的选择:根据分离物中各成分的极性,溶解度和吸附剂的活性.在实践中,选择洗脱液的顺序是极性由小到大,离子强度由低到高.
51. 层析柱绝大多数是下端为细口并带有筛板的玻璃管.
52. 装柱的方法分干装法和湿装法两种.
53. 薄层层析是以涂布于薄板或涤纶片等载体上的基质为固定相,以液体为流动相的一种层析方法.
54. 薄层层析可根据固定相的种类分为:吸附薄层层析,分配薄层层析,离子交换薄层层析.
55. 聚酰胺薄膜层析:聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键所致.
第五章:离子交换层析
1.概念:离子交换层析是在以离子交还剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的.
2.基本原理:离子交换剂是由载体,电荷基因和反离子构成的.它在水中盛不溶解状态,能释放出反离子.同时,它将与溶液中的其它离子或离子化合物相互结合,结合后本身的理化性质仍然保持不变.
3.离子交换层析之所以能成功地把各种无机离子,有机离子或生命大分子物质分开,其主要依据是不同的离子交换剂对各种离子或离子化合物有不同的结合力.
4.离子交换剂的分类:根据载体的足成核性质,可以分为:疏水性离子交换剂和亲水性离子交换剂.
5.疏水性离子交换剂中的载体是一种人工合成,与水结合力小的树脂物质.分为阴阳离子两种.
6.阳离子交换剂的电荷基因带负电,反离子带正电.
7.亲水性离子交换剂中的载体是一类天然的或人工合成的,与水结合力较大的物质.常用的有纤维素,交联纤维素,交联葡聚糖和交联琼脂糖等.
8.纤维素离子交换剂是以微晶纤维素为载体,借助化学方法引入电荷基因构成的.
9.交联葡聚糖离子交换剂是以交联葡聚糖G-25和G-50为载体,通过化学方法引入相应电荷基因制成的.
10.琼脂糖离子交换剂主要是以交联琼脂糖CL-6B等为载体,通过化学方法引入电荷基因制成的.
11.在水溶液中,离子交换剂吸水量或膨胀度与载体和电荷基因的性质,以及溶液的pH和离子强度是密切相关的.
12.电荷基因团的电荷强弱,对离子交换剂的膨胀度影响是极为明显的.
13.当离子交换剂带有同种电荷或解离度最大时,各种电荷基团之间的排斥力最大,膨胀度也最大.
14.交换容量:是指离子交换剂与溶液中离子或离子化合物进行交换的能力.
15.影响交换容量的因子:筛孔,离子强度,pH.
16. 离子交换剂可以分为三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子.
17. 酸碱处理的次序决定了离子交换剂携带反离子的类型.
18. 使用过的离子交换剂，可采用一定的方法使其恢复原来的性状，这一过程叫做再生.
19. 离子交换层析的应用:水处理, 分离纯化小分子物质, 分离纯化生物大分子物质.
20. 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一而又可逆的亲和力而使生物分子分离纯化的层析技术.
21. 亲和层析原理:通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化.
22. 在亲和层析中，作为固定相的一方称为配基.
23. 基质的活化是指通过对基质进行一定的化学处理，使基质表面上的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团.
24. 亲和层析的基本操作:上样, 平衡, 洗脱.
25. 亲和层析优缺点:只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高, 它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数,蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加稳定，其结果提高了活性回收率,外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利.


26. 亲和层析的应用:抗体和抗原,生物素和亲和素, 维生素、激素和结合转运蛋白, 激素和受体蛋白, 凝集素和糖蛋白, 辅酶, 多核苷酸和核酸, 氨基酸, 分离病毒、细胞, 金属螯合色谱.
27. 薄层层析是将作为固定相的支持剂均匀地铺在支持板上，成为薄层，把样品点到薄层上，用适宜的溶剂展开，从而使样品各组分达到分离的层析技术.
28.薄层层析分类:薄层吸附层析,薄层分配层析,薄层离子交换层析,薄层凝胶层析.
29.薄层层析特点: 速度快,分辨率比纸层析高,不受温度影响.缺点是Rf值的重现性比纸层析差.
30.薄层板常用的制作方法: 浸涂法, 喷涂法, 倾斜涂布法, 推铺法.
31. 气相色谱法是以气体作为流动相对混合组分进行分离分析的方法.
32. 气相色谱法的分离度和检测灵敏度比液相色谱高.
33. 高效液相色谱法特点:高压,高速,高效,高灵敏度.
34.高效液相色谱法分类: 液固吸附色谱 , 液-液分配色谱.
35. 示差折光检测器是利用连续测定流通池中溶液折射率的变化来测定试液浓度的检测器.
36. HPLC与GC差别:
HPLC GC
分析对象 适于溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性和热稳定性的限制 适用于能气化,热稳定性好,且沸点较低的样品.
流动相差别 流动相为液体,流动相与组分间有亲和作用,能提高柱的选性,对分离起正向作用 流动相为惰性气体, 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用
操作条件差别 室温,高压 加温操作
电泳
1.带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动，称为电泳.
2.影响泳动度的因素:电场强度,溶液pH,溶液的离子强度,电渗,温度,支持物,
3.用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳优点: 操作简单，电泳速度快;电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好;可直接用紫外光灯监测及定量测定; 电泳后区带易染色.
4.醋酸纤维素薄膜电泳特点: 分离效果好,快速省时, 灵敏度高，样品用量少, 应用面广,易保存,易定量.
5. 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法.
6. PAGE应用广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量的制备，还可测定分子量、等电点等.
7.影响凝胶聚合的因素:Acr及Bis的纯度, AP、核黄素、TEMED,pH,温度,氧分子.
8. PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统两大类.
9. 大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ，这就是分子筛效应.
10.垂直板电泳的优点: 表面积大而薄, 在同一块胶板上，可同时进行10个以上样品的电泳，便于在同一条件下比较分析鉴定, 胶板制作方便，易剥离，样品用量少，分辨率高, 便于长期保存与扫描, 可进行双向电泳.
11. SDS是一种阴离子去污剂，它能破坏蛋白质分子之间以及其它物质分子之间的非共价键.
12. 当蛋白质的分子量在15-200kD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系.
13.影响迁移率的因素: 二硫键是否完全被还原, 溶液中SDS的浓度, 溶液的离子强度.
14. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯.
15. Native-PAGE注意事项:蛋白质的等电点是最重要的影响因子,注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性.
16. Native-PAGE和SDS-PAGE的比较:天然凝胶电泳，与非变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性; 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS，而变性凝胶的有SDS; 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS，也没有巯基乙醇.
17. 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理: 利用各种蛋白质pI不同，以聚丙烯酰胺凝胶为电泳支持物，并在其中加入两性电解质载体，两性电解质载体在电场作用下，按各自pI形成从阳极到阴极逐渐增加的平滑和连续的pH梯度.
18. 两性电解质载体是用多烯多胺和不饱和酸合成的脂肪族多氨基多羧基化合物的混合物，其中不同的分子因氨基和羧基比例不同而具有不同的pI.
19. pH梯度的线性依赖于两性电解质的性质.
20. 载体两性电解质必备的条件: 可溶性要好, 紫外吸收低，不发荧光, 在等电点处必需有足够的缓冲能力, 在pI处应有良好的电导及相同的电导系数, 分子量要小, 化学性能稳定, 无毒、无生物学效应.
21.将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜上，再进行杂交的方法,被称为Southern印记法;RNA为Northern印记法;将蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜的装置，将蛋白质转移到膜上，再与相应的抗体等配体反应，称为Westehern印记法;用电转移法将等电聚焦后的蛋白质区带从凝胶转移到特定膜上，称为Eastern印迹法.
22. 高效毛细管电泳(HPCE)是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离、分析物质的一类液相技术
23.高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进: 一是采用了0.05mm左右内径的毛细管; 二是采用了高达数千伏的电压.


维生素，激素和结合转运蛋白的亲和机制是什么