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0老师给我我的方法是使用磷酸体系ph8.5进行上样的缓冲,但是我之前接触过的蛋白a纯化都是ph7.4的上样,想问问各位大佬这个上样的ph到底影响结合打那个因素啊😫,求告知
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0Capto L柱子20%乙醇溶液保存,室温下放了两个星期,还能用吗? 忘记收柱子了,放了俩星期,不懂还能不能用,有没有小伙伴们遇到过这种问题呀???求助!
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1在蛋白质比色定量试验中,最常用的方法是二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法?BCA法是Lowry测定法的一种改进方法,与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法操作更简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好,几乎没有干扰物质的影响,灵敏度高(微量检测可达到0.5μg/ml),应用更加灵活。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么? 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量,
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01、转膜不充分 (1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)靶蛋白分子量小于10 000 选择小孔径的膜,缩短转移时间。 (3)靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。 (4)甲醇浓度过高 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离,从而沉淀在凝胶中,同时会使凝胶收缩或变硬,从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替。 (5)转移时间不够 对于厚的胶
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0在蛋白质比色定量试验中,最常用的方法是二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法?BCA法是Lowry测定法的一种改进方法,与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法操作更简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好,几乎没有干扰物质的影响,灵敏度高(微量检测可达到0.5μg/ml),应用更加灵活。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么? 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量,
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0系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)是一种严重的自身免疫性疾病,主要特征为免疫调节功能紊乱,通过自身反应性细胞和抗体可引发炎性细胞因子的过度产生和攻击正常组织(心脏、关节、皮肤、肺、血管、肝脏、肾脏和神经系统)。流行病学数据显示,我国SLE疾病负担较重,预估发病率约为8.57/10万人年,位居全球第四位。其中约90%的SLE患者是女性,其余10%为男性及儿童。研究显示,SLE患者5年生存率从20世纪50年代的50%~60%升高至90年代的超过9
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00何为特应性皮炎? 特应性皮炎(atopic dermatitis,AD,也叫特应性湿疹)是一种常见的慢性、复发性炎症性皮肤病,不同国家的儿童患病率为2.7%至20.1%,而成人患病率为2.1%至4.9%。主要表现为剧烈的瘙痒、明显的湿疹样变和皮肤干燥。其发病与遗传、环境因素及精神压力因素相关,研究表明染色体 3p26-22,3q13-21,15q14-21,17q21-25 和 18q11-12 区域存在AD易感位点及相关候选基因,并与AD发病密切相关。环境因素主要包括过敏原(如室尘螨、动物毛皮、花粉、食物)0何为特应性皮炎? 特应性皮炎(atopic dermatitis,AD,也叫特应性湿疹)是一种常见的慢性、复发性炎症性皮肤病,不同国家的儿童患病率为2.7%至20.1%,而成人患病率为2.1%至4.9%。主要表现为剧烈的瘙痒、明显的湿疹样变和皮肤干燥。其发病与遗传、环境因素及精神压力因素相关,研究表明染色体 3p26-22,3q13-21,15q14-21,17q21-25 和 18q11-12 区域存在AD易感位点及相关候选基因,并与AD发病密切相关。环境因素主要包括过敏原(如室尘螨、动物毛皮、花粉、食物)00每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准液,其测定浓度与校准曲线标准点的浓度相对误差不得超过规定范围,如果超过规定相对误差,需重新绘制校准曲线。 也可以这样说,不同的分析项目,不同的分析方法,校准曲线斜率的稳定性不同。如校准曲线的斜率较为稳定,则在样品分析时,可只测定两个标准点,当此两个标准点与原曲线相应点的相对偏差均小于5%时,可使用原校准曲线。因此,样品分析前,需根据斜率的稳定性来确定是否需同时0000001、转膜不充分 (1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)靶蛋白分子量小于10 000 选择小孔径的膜,缩短转移时间。 (3)靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。 (4)甲醇浓度过高 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离,从而沉淀在凝胶中,同时会使凝胶收缩或变硬,从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替。 (5)转移时间不够 对于厚的胶0一、免疫荧光技术 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技0002蛋白分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤: (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,1家人们,有在泰州百英生物工作的吗?待遇如何?工作强度大吗?求回复5待遇从优,包住宿,纯化,细胞,都招人,有人要来吗?0免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的抗体将A蛋白沉淀下来,在细胞内与A蛋白直接相互作用的B蛋白或与其间接相互作用的C蛋白能一起被沉淀下来。使用western blot检测沉淀中是否存在B或C蛋白来确定B或C蛋白与A蛋白的相互作用。 用01蛋白质双向电泳是将蛋白质等电点和分子量两种特性结合起来进行蛋白质分离的技术。蛋白质双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。简明地理解,第一项进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点;随后,再沿垂直的方向进行分子量的分离。 第062蛋白纯化相关的问题,可以回复~了解的会给回答...三年的纯化经验~0蛋白纯化系统 特点: 无需预热,开机基线即可平衡; 高清10.1寸触摸屏工业电脑小巧紧凑; 配置高灵敏的固定波长紫外检测器; 中英文操作界面可互换,操作简单,易于学习和使用。 可根据您的需求预设程序进行操作。 数据实时自动保存,可防止意外断电导致的数据丢失; 采用高精度的恒流泵,流速精度可达±1.2%; 实验数据支持Excel导出; 支持馏分收集器全收集、AU值以及电率导收集(选配)。13做蛋白纯化快2年了 该犯的错误,不该犯的错误基本都犯过了,但是有一种感觉,这个行业,不是人少,而是这个行业玩贴吧的人少。3请问有没有知道融合了Strep tagⅡ的重组蛋白,经过Strep Trap HP柱纯化之后,蛋白失活是什么造成的吗?恳请了解的可以答复一下。谢谢!0查了除咪唑的方法,有过脱盐柱和透析的方法,有做过的大佬知道那种方法好吗,目的蛋白大小50kd。有透析液配方吗,我有查到但是不知道好不好想问问做过的朋友0501深圳知名药企招细胞培养(工程师-副经理)、蛋白纯化(工程师-副经理)、细胞活性检测(工程师)、原辅料分析工程师、质量保证运营主管,地点深圳大鹏新区靠近惠州,联系方式:19357609120(何先生)04求助大神,多抗中如何提纯单抗?4想问一下有没有做过包涵体纯化出蛋白的呢00020无细胞表达系统是一种以外源DNA或mRNA为模板,利用细胞抽提物中的细胞合成机器,蛋白折叠因子及其他相关酶系,通过添加氨基酸和T7聚合酶和能量物质来实现蛋白表达的体外系统。其中包括真核无细胞表达系统和原核无细胞表达系统。 艾柏森生物优势 1.更快得到数据,仅需1小时即可获得功能蛋白,而基于细胞的表达系统则需要数天。 2.节约时间,表达蛋白可以直接用后续实验,不需要额外纯化。 3.更适合蛋白表达,更适用于激酶等毒性蛋白的表达