老师给我我的方法是使用磷酸体系ph8.5进行上样的缓冲，但是我之前接触过的蛋白a纯化都是ph7.4的上样，想问问各位大佬这个上样的ph到底影响结合打那个因素啊😫，求告知

我对一个157 kDa的NRPS蛋白进行点突变、结构域替换的改造实验，以期改变蛋白活性。该蛋白原本比较容易纯化，但我的所有改造蛋白都出现不挂柱，纯化困难的情况。即使是只做几个点突变也导致了不挂柱。 起初我猜测是His标签被遮挡了，因此尝试替换SUMO、CBD标签，或者更换蛋白表达宿主依然不挂柱，但依然不挂柱，纯化不到蛋白。求教大佬们有没有遇到过类似问题，以及如何解决？ 在设计蛋白改造时，有没有办法规避这种情况？

想问一下大家有谁知道，如果蛋白均一度不够，在AKTA纯化时，峰型很杂，考染结果很好，这种情况该怎么解决啊，求大佬

Capto L柱子20%乙醇溶液保存，室温下放了两个星期，还能用吗？ 忘记收柱子了，放了俩星期，不懂还能不能用，有没有小伙伴们遇到过这种问题呀？？？求助！

在蛋白质比色定量试验中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法？BCA法是Lowry测定法的一种改进方法，与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法操作更简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量，

1、转膜不充分 (1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)靶蛋白分子量小于10 000 选择小孔径的膜，缩短转移时间。 (3)靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。 (4)甲醇浓度过高 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替。 (5)转移时间不够 对于厚的胶

在蛋白质比色定量试验中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法？BCA法是Lowry测定法的一种改进方法，与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法操作更简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量，

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种严重的自身免疫性疾病，主要特征为免疫调节功能紊乱，通过自身反应性细胞和抗体可引发炎性细胞因子的过度产生和攻击正常组织(心脏、关节、皮肤、肺、血管、肝脏、肾脏和神经系统)。流行病学数据显示，我国SLE疾病负担较重，预估发病率约为8.57/10万人年，位居全球第四位。其中约90%的SLE患者是女性，其余10%为男性及儿童。研究显示，SLE患者5年生存率从20世纪50年代的50%~60%升高至90年代的超过9

何为特应性皮炎？ 特应性皮炎(atopic dermatitis，AD，也叫特应性湿疹)是一种常见的慢性、复发性炎症性皮肤病，不同国家的儿童患病率为2.7%至20.1%，而成人患病率为2.1%至4.9%。主要表现为剧烈的瘙痒、明显的湿疹样变和皮肤干燥。其发病与遗传、环境因素及精神压力因素相关，研究表明染色体 3p26-22，3q13-21，15q14-21，17q21-25 和 18q11-12 区域存在AD易感位点及相关候选基因，并与AD发病密切相关。环境因素主要包括过敏原(如室尘螨、动物毛皮、花粉、食物)

何为特应性皮炎？ 特应性皮炎(atopic dermatitis，AD，也叫特应性湿疹)是一种常见的慢性、复发性炎症性皮肤病，不同国家的儿童患病率为2.7%至20.1%，而成人患病率为2.1%至4.9%。主要表现为剧烈的瘙痒、明显的湿疹样变和皮肤干燥。其发病与遗传、环境因素及精神压力因素相关，研究表明染色体 3p26-22，3q13-21，15q14-21，17q21-25 和 18q11-12 区域存在AD易感位点及相关候选基因，并与AD发病密切相关。环境因素主要包括过敏原(如室尘螨、动物毛皮、花粉、食物)

提取完DNA或RNA之后，通常需要测浓度，这也是质检的主要方法。在分光光度计上进行的吸光度测量包括样品中在不同波长处吸收的所有分子的吸光度。由于核苷酸、RNA、单链DNA和双链DNA都在260 nm处吸收，因此它们将检测样品的总吸光度。观测指标也就是260/280 and 260/230 Ratios，所以下面分别介绍： 260/280 Ratio 260 nm和280 nm处的吸光度比用于评估DNA和RNA的纯度。通常认为~1.8的比例是DNA的“纯”比例；一般认为~2.0的比率为RNA的“纯”。如果这两种情况下的比

每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准液，其测定浓度与校准曲线标准点的浓度相对误差不得超过规定范围，如果超过规定相对误差，需重新绘制校准曲线。 也可以这样说，不同的分析项目，不同的分析方法，校准曲线斜率的稳定性不同。如校准曲线的斜率较为稳定，则在样品分析时，可只测定两个标准点，当此两个标准点与原曲线相应点的相对偏差均小于5%时，可使用原校准曲线。因此，样品分析前，需根据斜率的稳定性来确定是否需同时

适用范围 本思路仅适用于反向色谱法分析离子化合物方法开发中流动相pH的确定。 1、考察离子化合物的pKa值 pKa：酸式解离常数Ka的负对数，即 ： pKa越小，酸性越强；反之，酸性越弱。pKa的大小和化合物本身的结构有关，也和溶剂有关，比如在水中测到的pKa和在DMSO中测到的就不一样。 既然pKa很重要，我们怎么才能获得分析物的pKa值呢？ 第一，对于已知化合物，我们可以通过一些数据库进行查询。在这里比较推荐两个开放的数据库，一个是英国RSC的ht

1、转膜不充分 (1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)靶蛋白分子量小于10 000 选择小孔径的膜，缩短转移时间。 (3)靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。 (4)甲醇浓度过高 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替。 (5)转移时间不够 对于厚的胶

一、免疫荧光技术 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技

蛋白Marker定义和用途 蛋白Marker：即蛋白分子量标准，是一些已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。 在Western Blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是其中小小的一环，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白Marker还有显示转膜是否成功、以及蛋白在凝胶上的电泳程度

我们先来了解一下琼脂糖核酸电泳的理论知识 DNA分子是一种自身不会发出荧光的大分子，需要相应的核酸分子染料结合到DNA分子的大沟处，通过激发光激发DNA –核酸染料复合物，复合物会发出一束强荧光，通过相应的滤光片过滤得到单波长的发射光，通过照相机或者肉眼捕获就能够检测到相应的DNA分子。 从核酸电泳发展至今，绝大多数的分子生物学实验室选择溴化乙锭（EtBr，也简称EB）作为核酸分子染料，由于EB的光谱特性，又不得不选择紫外光作

蛋白质是氨基酸的聚合物，二十种不同类型的氨基酸天然存在于蛋白质中，根据构成多肽主链的氨基酸的类型、数量和序列，蛋白质彼此不同。蛋白质是生物体内执行各种功能的复杂分子，在DNA复制、转录、翻译等多个细胞过程中发挥作用。 了解蛋白质的结构、功能和相互作用对于理解生物系统的底层机制和开发新的疾病治疗方法至关重要。 蛋白质分析工具提供了研究蛋白质结构、功能和相互作用的方法。这些工具使用各种技术，包括序列分析、结

蛋白分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤： (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，

家人们，有在泰州百英生物工作的吗？待遇如何？工作强度大吗？求回复

待遇从优，包住宿，纯化，细胞，都招人，有人要来吗？

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础，广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 如果细胞内两蛋白（A、B）有直接或间接的相互作用时，那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的抗体将A蛋白沉淀下来，在细胞内与A蛋白直接相互作用的B蛋白或与其间接相互作用的C蛋白能一起被沉淀下来。使用western blot检测沉淀中是否存在B或C蛋白来确定B或C蛋白与A蛋白的相互作用。 用

蛋白质双向电泳是将蛋白质等电点和分子量两种特性结合起来进行蛋白质分离的技术。蛋白质双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。简明地理解，第一项进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离。 第

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蛋白纯化相关的问题，可以回复~了解的会给回答...三年的纯化经验~

蛋白纯化系统 特点： 无需预热，开机基线即可平衡； 高清10.1寸触摸屏工业电脑小巧紧凑； 配置高灵敏的固定波长紫外检测器； 中英文操作界面可互换，操作简单，易于学习和使用。 可根据您的需求预设程序进行操作。 数据实时自动保存，可防止意外断电导致的数据丢失； 采用高精度的恒流泵，流速精度可达±1.2%； 实验数据支持Excel导出； 支持馏分收集器全收集、AU值以及电率导收集（选配）。

做蛋白纯化快2年了 该犯的错误，不该犯的错误基本都犯过了，但是有一种感觉，这个行业，不是人少，而是这个行业玩贴吧的人少。

请问有没有知道融合了Strep tagⅡ的重组蛋白，经过Strep Trap HP柱纯化之后，蛋白失活是什么造成的吗？恳请了解的可以答复一下。谢谢！

查了除咪唑的方法，有过脱盐柱和透析的方法，有做过的大佬知道那种方法好吗，目的蛋白大小50kd。有透析液配方吗，我有查到但是不知道好不好想问问做过的朋友

头疼

Hy-Hass系列模块化蛋白纯化系统简介： 流速范围：0~800mL/min可定制 耐压：最大40Mpa（5600psi） 波长范围：（195-435），可定制（195-950nm） 检测波长：三波长同时检测,可定制（6、10、15、全波长） 吸光度范围:±4AU 接口：网口通信 适用范围 通用中试级蛋白纯化系统，模块可增减。应用从实验室到工业级的生物蛋白、抗体、疫苗等研发和生产。主要服务于各大生物公司，CRO\CDMO企业，为其提供完备的解决研发和生产解决方案。

多通道高通量蛋白纯化系统简介： 多通道：单台电脑控制多台仪器，可并行，串行 普通电脑：最多16台 流速范围：0~800mL/min可定制 耐压：最大40Mpa（5600psi） 波长范围：（195-435），可定制（195-950nm） 检测波长：三波长同时检测,可定制（6、10、15、全波长） 吸光度范围:±4AU 接口：网口通信 适用范围 通用中试级蛋白纯化系统，模块可增减。应用从实验室到工业级的生物蛋白、抗体、疫苗等研发和生产。主要服务于各大生物公司，CRO\CDMO企业，为其提供

深圳知名药企招细胞培养（工程师-副经理）、蛋白纯化（工程师-副经理）、细胞活性检测（工程师）、原辅料分析工程师、质量保证运营主管，地点深圳大鹏新区靠近惠州，联系方式：19357609120（何先生）

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求助大神，多抗中如何提纯单抗？

想问一下有没有做过包涵体纯化出蛋白的呢

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今日分享一些相关蛋白纯化全过程中应当考虑的一些要素。 1、在开展一个蛋白纯化以前，应当对其蛋白有一定的科学研究，包含其性质，敏感性，比如该蛋白的溶解度，对高盐或pH比较敏感，是不是非常容易空气氧化等； 2、需要考虑蛋白的主要用途，来决定制取蛋白的数量级规模，这就需要充分考虑层析柱的规格，获得的蛋白浓度值怎样，是不是需要维持其活力及其防止多余的污染物； 3、蛋白的检验方式 ，针对带有不一样成分的蛋白水溶液，其检

在微生物内进行蛋白质表达是生物科技中的核心技术。然而，每种蛋白质都具有其独特的结构性质，比如二硫键（disulfide bonds）数量，是否存在疏水区域 (hydrophobic regions)，是否存在跨膜区域 (transmembrane domains)，是否具有糖基化 (glycosylations) 等翻译后修饰过程等， 所有的这些性质都可能决定着蛋白质表达过程的难易。在与目的蛋白质来源相似的宿主内表达蛋白质要相对容易些。然而，大多时候，我们需要在与蛋白质来源不同的宿主内进行蛋白质的表达

无细胞表达系统是一种以外源DNA或mRNA为模板，利用细胞抽提物中的细胞合成机器，蛋白折叠因子及其他相关酶系，通过添加氨基酸和T7聚合酶和能量物质来实现蛋白表达的体外系统。其中包括真核无细胞表达系统和原核无细胞表达系统。 艾柏森生物优势 1.更快得到数据，仅需1小时即可获得功能蛋白，而基于细胞的表达系统则需要数天。 2.节约时间，表达蛋白可以直接用后续实验，不需要额外纯化。 3.更适合蛋白表达，更适用于激酶等毒性蛋白的表达